荧光分光光度计的操作流程步骤

荧光分光光度计的操作流程遵循标准化、系统化的步骤，确保测量数据的准确性与仪器的长期稳定运行。以下是基于主流厂商手册与实验室规范整合的完整操作流程：

一、开机准备‌

‌电源顺序‌：

接通稳压电源，确保电压稳定；

打开计算机与打印机电源；

启动主机电源开关（POWER），仪器进入自检状态，右上方指示灯常亮。

‌预热要求‌：

仪器需预热 ‌15–30分钟‌，若进行定量分析，建议预热 ‌≥30分钟‌，以确保光源与检测器热平衡。

️ 预热期间应‌打开样品室盖‌，切断光路，避免光电倍增管（PMT）长时间受光疲劳。

二、样品制备与放置‌

‌比色皿选择‌：

必须使用‌四面透光石英比色皿‌，普通玻璃或塑料会吸收紫外光，导致信号失真。

‌操作规范‌：

拿取时仅捏住‌上角非透光面‌，避免指纹污染透光面；

液体体积控制在‌2/3容量‌，防止溢出污染光路；

外壁用‌擦镜纸‌轻拭干净，确保无水渍或污渍；

放入样品室时，‌透光面朝向光路‌，方向保持一致（如横线朝外）。

‌参比溶液‌：

使用与样品相同溶剂作为空白对照，置于样品架槽，用于仪器自动调零（T=100%）。

三、测量模式选择‌

根据实验目的选择以下模式之一：

‌激发光谱扫描‌：固定发射波长，扫描激发波长，获取λ_ex值。

‌发射光谱扫描‌：固定激发波长，扫描发射波长，获取λ_em值。

‌定量分析‌：

配制系列标准溶液（浓度梯度）；

在固定λ_ex与λ_em下测定荧光强度；

绘制标准曲线（强度–浓度），外推未知样品浓度。

‌三维扫描（3D Scan）‌：同时扫描激发与发射波长，生成荧光地形图，用于复杂体系分析。

建议每次测量前进行‌背景扣除‌，消除溶剂或杂质荧光干扰。

‌四、关机与维护‌

‌关机顺序‌：

取出比色皿，立即用去离子水冲洗，再用乙醇清洗，倒置晾干；

退出软件系统，‌关闭氙灯‌（非直接断电）；

‌保持主机通电10分钟以上‌，使灯室风扇持续散热；

关闭主机电源、稳压电源、计算机与打印机。

‌长期维护‌：

若仪器停用超过一周，建议每周开机预热30分钟，防潮防尘；

定期（每20天）进行‌激发与发射波长校准‌，确保波长准确性；

氙灯寿命约2500小时，更换后需重新校准光路。